ПОЛУЧЕНИЕ ИММУНОРЕАГЕНТОВ ДЛЯ СЕРОЛОГИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ДИТИЛЕНХОЗОВ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ И ДЕКОРАТИВНЫХ КУЛЬТУР

Цель исследований: – получение иммунореагентов для определения двух видов паразитических нематод – Ditylenchus destructor и D. dipsaci (препаратов антигенов и антисывороток к ним).

Материалы и методы. Было проведено три иммунизации лабораторных животных (белые беспородные мыши) в дозе 20 мкг целевого белка на особь с интервалом 7–10 сут. Характеристика эффективного титра полученных антисывороток была выполнена методом дот-ИФА с использованием вторичных антител козы к иммуноглобулинам мыши, коньюгированных с щелочной фосфатазой. Для количественного определения специфичности полученных иммунореагентов использовали планшетный ИФА в непрямом формате.

Результаты и обсуждение. Полученные антисыворотки имеют специфичность по отношению к двум видам нематод D. destructor и D. dipsaci, а также к одному представителю непаразитических нематод Rhabditis sp. Специфичность получаемых антисывороток находится в пределах 82–97 %. Чувствительность антисывороток к гомогенатам стеблевых нематод растений D. destructor и D. dipsaci при титре антисывороток 1 : 3000 составляет 1 нг и 50 нг соответственно.

1. Анисимов Б. В., Белов Г. Л., Варицев Ю. А., Елан- ский С. Н., Журомский Г. К., Завриев С. К., Зейрук В. Н., Иванюк В. Г., Кузнецова М. А., Пляхневич М. П., Пшеченков К. А., Симаков Е. А., Склярова Н. П., Сташевски З., Усков А. И., Яшина И. М. Защита картофеля от болезней, вредителей и сорняков. М.: Картофелевод, 2009. 272 с.

2. Бутенко К. О., Шестеперов А. А. Особенности эпифитотического процесса при дитиленхозе картофеля, моркови и других растений // Тр. Всерос. ин-та гельминтол. 2005. Т. 41. – С. 113–123.

3. Виноградская Г. М. Серологическая диагностика дитиленхоза картофеля, вызываемого нематодой Ditylenchus destructor Thorne, 1945: дис. … канд. биол. наук. М., 1977. 128 с.

4. Егоров А. М., Осипов А. П., Дзантиев Б. Б., Гаврилова Е. М. Теория и практика иммуноферментного анализа. М.: Высшая школа, 1991. 288 с.

5. МСФМ 27. Диагностические протоколы. ДП 8: Ditylenchus dipsaci и Ditylenchus destructor. 2015.

6. Нематоды растений и почвы. Род Дитиленхус / отв. ред. В. Г. Губина. М.: Наука, 1982. 248 с.

7. Шестеперов А. А., Черкашин В. И., Бутенко К. О. Дитиленхоз картофеля и меры борьбы с ним (Рекомендации). М.: Росинформагротех, 2006. 72 с.

8. Ausubel F., Brent R. et al. Current Protocols in Molecular Biology. John Wiley & Sons, 2003; 4648.

9. Ditylenchus destructor and Ditylenchus dipsaci. EPPO Bulletin. 2008; 38 (3): 363–373.

10. http://www.agroatlas.spb.ru/pests/Metadata/Meta_Ditylenchus_destructor_ru.htm.