vniigisРоссийский паразитологический журналRussian Journal of Parasitology1998-84352541-7843ВНИИП – филиал ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН10.31016/1998-8435-2019-13-2-89-94vniigis-373Research ArticleПАРАЗИТЫ РАСТЕНИЙPARASITES OF PLANTSПОЛУЧЕНИЕ ИММУНОРЕАГЕНТОВ ДЛЯ СЕРОЛОГИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ДИТИЛЕНХОЗОВ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ И ДЕКОРАТИВНЫХ КУЛЬТУРOBTAINING IMMUNO REAGENTS FOR SEROLOGICAL DETERMINATION OF DITYLENCHOSIS AGENTS IN AGRICULTURAL AND ORNAMENTAL PLANTSБутенкоК. О.ButenkoK. O.

117218, Москва, ул. Б. Черемушкинская, 28.

28, B. Cheremushkinskaya street, Moscow, Russia, 117218.

k002@yandex.ruШестеперовА. А.ShesteperovA. A.

117218, Москва, ул. Б. Черемушкинская, 28.

28, B. Cheremushkinskaya street, Moscow, Russia, 117218.

Всероссийский научно-исследовательский институт фундаментальной и прикладной паразитологии животных и растений – филиал Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Федеральный научный центр – Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени К. И. Скрябина и Я. Р. Коваленко Российской академии наук»РоссияAll-Russian Scientific Research Institute of Fundamental and Applied Parasitology of Animals and Plants – a branch of Federal State Budgetary Institution of Science "Federal Scientific Center – All-Russian Scientific Research Institute of Experimental Veterinary Medicine named after K. I. Skryabin and Ya. R. Kovalenko of the Russian Academy of Sciences"Russian Federation2019200920191328994Copyright © Бутенко К.О., Шестеперов А.А., 20192019Бутенко К.О., Шестеперов А.А.Butenko K.O., Shesteperov A.A.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://vniigis.elpub.ru/jour/article/view/373Цель исследований

Цель исследований: – получение иммунореагентов для определения двух видов паразитических нематод – Ditylenchus destructor и D. dipsaci (препаратов антигенов и антисывороток к ним).

Материалы и методы

Материалы и методы. Было проведено три иммунизации лабораторных животных (белые беспородные мыши) в дозе 20 мкг целевого белка на особь с интервалом 7–10 сут. Характеристика эффективного титра полученных антисывороток была выполнена методом дот-ИФА с использованием вторичных антител козы к иммуноглобулинам мыши, коньюгированных с щелочной фосфатазой. Для количественного определения специфичности полученных иммунореагентов использовали планшетный ИФА в непрямом формате.

Результаты и обсуждение

Результаты и обсуждение. Полученные антисыворотки имеют специфичность по отношению к двум видам нематод D. destructor и D. dipsaci, а также к одному представителю непаразитических нематод Rhabditis sp. Специфичность получаемых антисывороток находится в пределах 82–97 %. Чувствительность антисывороток к гомогенатам стеблевых нематод растений D. destructor и D. dipsaci при титре антисывороток 1 : 3000 составляет 1 нг и 50 нг соответственно.

The purpose of the research is obtaining immuno reagents for determination of two types of parasitic nematodes Ditylenchus destructor and D. dipsaci (antigens and antiserums for them).

Materials and methods

Materials and methods. Three immunizations of laboratory animals (white scrub mice) have been carried out at a dose of 20 mcg of the target protein per animal at 7–10 day intervals. The efficient titer of the antiserums obtained was described by the Dot-ELISA method using secondary goat anti-mouse immunoglobulins conjugated with alkaline phosphatase. For measuring a specificity of the obtained immuno reagents, an ELISA plate in an indirect format was used.

Results and discussion

Results and discussion. The antiserums obtained have a specificity for two types of nematodes D. destructor and D. dipsaci, and for one non-parasitic nematode Rhabditis sp. The specificity of the obtained antiserums ranges from 82 to 97%. The sensitivity of antiserums to homogenates of stem nematodes D. destructor and D. dipsaci of plants at the antiserum dilution 1 : 3000 is 1 ng and 50 ng accordingly.

нематодырастенияпочвакартофельдитиленхозыэффективностьдиагностикаспецифичностьnematodesplantssoilpotatoditylenchosisefficiencydiagnosticsspecificityReferencesАнисимов Б. В., Белов Г. Л., Варицев Ю. А., Елан- ский С. Н., Журомский Г. К., Завриев С. К., Зейрук В. Н., Иванюк В. Г., Кузнецова М. А., Пляхневич М. П., Пшеченков К. А., Симаков Е. А., Склярова Н. П., Сташевски З., Усков А. И., Яшина И. М. Защита картофеля от болезней, вредителей и сорняков. М.: Картофелевод, 2009. 272 с.Anisimov B. V., Belov G. L., Varitsev Yu. А., Elanskiy S. N., Zhuromskiy G. K., Zavriev S. K., Zeiruk V. N., Ivanyuk V. G., Kuznetsova М. А., Plyakhnevich M. P., Pshechenkov K. А., Simakov Е. А., Sklyarova N. P., Stashevski Z., Uskov А. I., Yashina I. М. Protection of Potatoes against Diseases, Pests and Weeds. М.: Kartofelevod (Potatogrower), 2009; 272. (In Russ.)Бутенко К. О., Шестеперов А. А. Особенности эпифитотического процесса при дитиленхозе картофеля, моркови и других растений // Тр. Всерос. ин-та гельминтол. 2005. Т. 41. – С. 113–123.Butenko K. О., Shesteperov А. А. Special aspects of an epiphytotic process at ditylenchosis of potato, carrot and other plants. Trudy Vserossiyskogo in-ta gel'mintologii = Works of the All-Russia Institute of Helminthology. 2005; 41: 113–123. (In Russ.)Виноградская Г. М. Серологическая диагностика дитиленхоза картофеля, вызываемого нематодой Ditylenchus destructor Thorne, 1945: дис. … канд. биол. наук. М., 1977. 128 с.Vinogradskaya G. М. Serologic diagnosis of ditylenchosis of potato caused by nematode Ditylenchus destructor Thorne, 1945: dis. … Ph. D, Biology. М., 1977; 128. (In Russ.)Егоров А. М., Осипов А. П., Дзантиев Б. Б., Гаврилова Е. М. Теория и практика иммуноферментного анализа. М.: Высшая школа, 1991. 288 с.Egorov А. М., Osipov А. P., Dzantiev B. B., Gavrilova Е. М. Enzyme-linked immunoassay theory and practice. М.: Higher School, 1991; 288. (In Russ.)МСФМ 27. Диагностические протоколы. ДП 8: Ditylenchus dipsaci и Ditylenchus destructor. 2015.International Standards for Phytosanitary Measures 27. Diagnostic Protocols. DP 8: Ditylenchus dipsaci and Ditylenchus destructor. 2015.Нематоды растений и почвы. Род Дитиленхус / отв. ред. В. Г. Губина. М.: Наука, 1982. 248 с.Plant and Soil Nematodes. Ditylenchus / Responsible Editor V. G. Gubina. М.: Science, 1982; 248. (In Russ.)Шестеперов А. А., Черкашин В. И., Бутенко К. О. Дитиленхоз картофеля и меры борьбы с ним (Рекомендации). М.: Росинформагротех, 2006. 72 с.Shesteperov А. А., Cherkashin V. I., Butenko K. О. Ditylenchosis of potato and its control (Recommendations). М.: Rosinformagrotech, 2006; 72. (In Russ.)Ausubel F., Brent R. et al. Current Protocols in Molecular Biology. John Wiley & Sons, 2003; 4648.Ausubel F., Brent R. et al. Current Protocols in Molecular Biology. John Wiley & Sons, 2003; 4648.Ditylenchus destructor and Ditylenchus dipsaci. EPPO Bulletin. 2008; 38 (3): 363–373.Ditylenchus destructor and Ditylenchus dipsaci. EPPO Bulletin. 2008; 38 (3): 363–373.http://www.agroatlas.spb.ru/pests/Metadata/Meta_Ditylenchus_destructor_ru.htm.http://www.agroatlas.spb.ru/pests/Metadata/Meta_Ditylenchus_destructor_ru.htm.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.