Идентификация таксономической принадлежности криптоспоридий у поросят в условиях северо-запада РФ при помощи молекулярно-генетических методов

Цель исследований – определение таксонов представителей рода Cryptosporidium у поросят при помощи молекулярно-генетических методик в условиях северо-запада РФ.
Материалы и методы. Пробы фекалий брали у поросят разного возраста в хозяйствах различных форм собственности, отличающихся климатогеографической зоной и технологией содержания животных на территории Вологодской области. При помощи микроскопических методов исследования выявляли «положительные» пробы, в которых присутствовали представители рода Cryptosporidium, сортировали их и подвергали глубокой заморозке. Затем пробы исследовали с использованием оборудования ЦКП «Геномные технологии, протеомика и клеточная биология» ФГБНУ ВНИИСХМ». Идентификацию видов рода Cryptosporidium в пробах фекалий сельскохозяйственных животных проводили с помощью высокопроизводительного секвенирования ампликонных библиотек фрагментов гена 18S рРНК, полученных в результате проведения вложенной полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Результаты и обсуждение. Была создана система праймеров для вложенной ПЦР, амплифицирующих потенциально видоспецифичный участок гена 18S рРНК размером 393 н.о. Последовательность праймера ILL_R2_ Zheng была модифицирована с внесением вырожденных позиций с целью сделать праймер более универсальным. В результате секвенирования библиотек фрагментов гена 18S рРНК, полученных с использованием выбранных праймеров, и последующего таксономического анализа полученных нуклеотидных последовательностей, было показано, что во всех исследованных образцах присутствуют представители только одного вида Сryptosporidium scrofarum.

1. Васильева В. А. Криптоспоридиоз и эзофагостомоз свиней при моноинвазиях и паразитоценозе: автореф. дис. … д-ра вет. наук. М., 1998. 41 с.

2. Горбов Ю. К., Мачинский А. П. Распространение ассоциативных заболеваний сельскохозяйственных животных и опыт борьбы с ними в Мордовской АССР // Паразитоценозы и ассоциативные болезни. М., 1984. С. 235–252.

3. Кряжев А. Л. Криптоспоридиоз телят в хозяйствах молочной специализации Северо-Запада России (эпизоотология, клиническая картина, терапия и профилактика): дис. … канд. вет. наук. М., 2005. 152 с.

4. Кряжев А. Л., Лемехов П. А. Криптоспоридиоз телят в хозяйствах молочной специализации Северо-Западного региона России. Монография. Вологда-Молочное: ИЦ ВГМХА, 2010. 111 с.

5. Кряжев А. Л., Новиков А. С., Никитин В. Ф. Эпизоотологическая ситуация по криптоспоридиозу поросят в промышленном свиноводстве Вологодской области // Ветеринария. 2020. № 1. С. 30–34. https://doi.org/10.30896/0042-4846.2020.23.1.30-34

6. Никитин В. Ф., Павласек И. Ассоциация гельминтов и кокцидий у телят в животноводческих комплексах // II Всесоюзный съезд паразитологов: тезисы докладов (Киев, октябрь 1983). Киев: Наукова думка, 1983. С. 235–246.

7. Новиков А. С., Кряжев А. Л. Криптоспоридиоз поросят в условиях северо-западного Нечерноземья РФ. Монография. Вологда–Молочное: Вологодская ГМХА, 2022. 112 с.

8. Kaupke A. Gawor J., Rzeżutka A., Gromadka R. Identification of pig-specific Cryptosporidium species in mixed infections using Illumina sequencing technology. Experimental parasitology. 2017; 182. 22-25. https://doi.org/10.1016/j.exppara.2017.09.020

9. Rahimah A. B., Cheah S. C., Rajinder S. Freezedrying of oil palm (Elaeis guineensis) leaf and its effect on the quality of extractable DNA. J. Oil Palm Res. 2006; 18. 296-304.

10. Sanger F., Nicklen S., Coulson A. R. DNA sequencing with chain-terminating inhibitors. Proceedings of the national academy of sciences. 1977; 74 (12): 5463-5467. https://doi.org/10.1073/pnas.74.12.5463

11. Wang R., Qiu S., Jian F., Zhang S., Shen Y., Zhang L., Ning C., Cao J., Qi M., Xiao L. Prevalence and molecular identification of Cryptosporidium spp. Parasitol. Res. 2010; 107. 1489–1494. https://doi.org/10.1007/s00436-010-2024-6

12. Xiao L., Morgan U. M., Limor J., Escalante A., Arrowood M., Shulaw W., Lal A. A. Genetic diversity within Cryptosporidium parvum and related Cryptosporidium species. Applied and environmental microbiology. 1999; 65 (8): 3386-3391. https://doi.org/10.1128/AEM.65.8.3386-3391.1999

13. Xiao L.Molecular epidemiology of cryptosporidiosis: an update. Exp. Parasitol. 2010; 124. 80–89. https://doi.org/10.1016/j.exppara.2009.03.018

14. Zheng S., Li D., Zhou C., Zhang S., Wu Y., Chang Y., Zhang L.Molecular identification and epidemiological comparison of Cryptosporidium spp. among different pig breeds in Tibet and Henan, China. BMC veterinary research. 2019; 15 (1): 1-8. https://doi.org/10.1186/s12917-019-1847-3