Разработка новых антигенов для серологической диагностики трипаносомозов животных и применение их для эпизоотологического мониторинга

Цель исследований – разработка способа получения эритроцитарных ДНК-содержащих и не содержащих антигенов Trypanosoma equiperdum и T. evansi, которые в дальнейшем могут быть использованы в серологических реакциях для дифференциации этих видов трипаносом.

Материалы и методы. Исследования выполняли в лаборатории протозоологии и Вышневолоцком филиале ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН, а также в животноводческих хозяйствах Российской Федерации и других стран с использованием клинических, микроскопических, гематологических, паразитологических, молекулярно-биологических и серологических методов.

Результаты и обсуждение. Проведенные впервые исследования показали, что можно использовать эритроцитарные ДНК-содержащие антигены T. equiperdum и T. evansi, полученные после 3-кратного введения мышам и кроликам смеси из трипаносомного антигена с добавлением 1,0 мл адьюванта (гидрогись алюминия) и обескровливания животных после 25–30 сут. Полученный осадок использовали как антиген для серологических исследований. Опыты показали, что кровь для приготовления позитивной сыворотки можно брать, когда антитела в РДСК находятся в титрах 1:20, в РНГА и ИФА - не ниже 1:400, отрицательной – когда сыворотка крови лошадей отрицательно реагирует в РДСК, РНГА и ИФА с антигенами T. equiperdum и T. evansi. Приготовленные нами тест-системы РДСК, РНГА и ИФА с антигенами, содержащими и не содержащими ДНК T. equiperdum и T. еvansi, привели к созданию универсальной тест-системы (РНГА) для дифференциации T. equiperdum от T. evansi.

1. Василевич Ф. И., Георгиу Х., Белименко В. В., Гулюкин М. И. Практическое руководство по борьбе с кровепаразитарными болезнями домашних животных. М.: ЗооВетКнига, 2015. 86 с.

2. Георгиу Х. ИФА для диагностики трипаносомоза (дурина) лошадей // Ветеринарная патология. 2003. № 1. С. 99-101.

3. Георгиу Х. Получение высокоактивных и высокоспецифичных трипаносомных сывороток // Ветеринария и кормление. 2014. № 1. С. 26-28.

4. Георгиу Х., Белименко В. В., Самойловская Н. А. Паразитарные болезни животных из Списка МЭБ. Монография. М.: Инфра-М, 2016. 88 с.

5. Гулюкин М. И., Заблоцкий В. Т., Белименко В. В., Христиановский П. И., Саруханян А. Р. Кровепаразитарные болезни домашних животных. М.: ЗооВетКнига, 2013. 86 с.

6. Гулюкин М. И., Георгиу Х., Заблотский В. T., Ломакина Н. Ф., Юров K. П., Туратье Л. Генетические анализы для дифференциальной диагностики трипаносомозов лошадей: дурин и сурра // Ветеринария и кормление. 2015. № 2. С. 16-19.

7. Ломакина Н. Ф., Георгиу Х., Заблоцкий В. Т., Гулюкин М. И., Туратье Л. Изучение генома возбудителей трипаносомозах лошадей (T. еquiperdum и T. evansi) // Ветеринария. 2013. № 3. С. 29-33.

8. Ломакина Н. Ф., Георгиу Х., Гулюкин М. И. Трудности дифференциации трипаносом T. evansi и T. equiperdum // «Молекулярная диагностика»: Сборник трудов VIII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием. М., 2014. Т. II. С. 491-492.

9. Юров К. П., Алексеенкова С. В., Гулюкин М. И., Георгиу Х., Амирбеков М. А., Аноятбеков М. А., Махмадшоев А. Н., Шодмонов И. Ш., Давятова М. Д., Туратье Л. Дифференциальная диагностика трипаносомозов у лошадей и филогенетический анализ возбудителя сурры (Т. еvansi) в Республике Таджикистан // Материалы докладов VI Международного ветеринарного конгресса. М., 2016. С. 320-322.

10. Claes F., Buscher P., Touratier L., Goddeeris B. M. Trypanosoma equiperdum: master of disguise or historical mistake? Trends Parasitol. 2005; 21 (7): 316–321.

11. Claes F., Radwanska M., Urakawa T. et al. Variable surface glycoprotein RoTat 1.2 PCR as a specific diagnostic tool for the detection of Trypanosoma evansi infections. Kinetoplastid Biol. Dis. 2004; 3; 3.

12. Clausen P. H., Chuluun S., Sodnomdarjaa R. et al. A field study to estimate the prevalence of Trypanosoma equiperdum in Mongolian horses. Vet. Parasitol. 2003; 115. 9–18.

13. Lai D. H., Hashimi H., Lun Z. R. et al. Adaptations of Trypanosoma brucei to gradual loss of kinetoplast DNA: Trypanosoma equiperdum and Trypanosoma evansi are petite mutants of T. brucei. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2008; 105 (6): 1999–2004.

14. Li Fj, Gasser R. B., Lai D. H., Claes F. et al. HCR approach for the detection of Trypanosoma brucei and Tr. equiperdum and their differentiation from T. evansi based on maxicircle kinetoplast DNA. Mol. Cell. Propes. 2007; 21 (1): 1–7.

15. Young R., Taylor J. E., Kurioka A., Becker M. et al. Isolation and analysis of the genetic diversity of repertoires of VSG expression site containing telomeres from Trypanosoma brucei gambiense, T. brucei and T. equiperdum. BMC Genomics. 2008; 9. 385.

16. Zablotskij V. T., Georgiu C., De Waal T. et al. The current challenges of dourine: difficulties in differentiating Trypanosoma equiperdum within the subgenus Trypanozoon. Rev. Sci. Tech. 2003; 22 (3): 1087–1096.

17. OIE Terrestrial Manual 2012. Chapter 2.1.17. P.213. http://www.oie.int/fileadmin/Home/eng/Health_standards/tahm/2.01.17_TRYPANO_SURRA.pdf.

18. OIE Terrestrial Manual. 2008. Chapter 2.5.3. P. 845 – 851. http://www.oie.int/fileadmin/Home/eng/Health_standards/tahm/2.05.03_DOURINE.pdf.