ИССЛЕДОВАНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ АПОПТОЗА ЛИМФОЦИТОВ КРОВИ ЖИВОТНЫХ ПРИ ГЕЛЬМИНТОЗАХ

Изучение роли апоптоза клеток крови позволяет наиболее точно определить механизмы развития иммунопатологии в целом, и иммуносупрессии - в частности. Целью исследований было изучить морфологические и молекулярные показатели апоптоза лимфоцитов периферической крови при трихоцефалезе мышей и пассалурозе кроликов для определения возможных механизмов развития вторичной иммунодепрессии при хронизации гельминтозного процесса. Материалы и методы . В ходе эксперимента животные были подразделены на следующие группы: 1) интактные мыши (контрольная группа) - 15 шт.; 2) интактные кролики (контрольная группа) - 10 шт.; 3) мыши, зараженные Trichocephalus muris (Schrank,1788) - 60 шт.; 4) кролики, зараженные Passalurus ambiguous (Rudolphi, 1819) - 30 шт. Для приготовления мазков через 1, 2, 3 и 6, 7, 8 недель после заражения служила кровь из хвостовой вены мышей и из ушной вены кроликов. Определение лейкоцитарной формулы и исследование морфологических признаков апоптоза проводили методом световой микроскопии мазков крови, окрашенных по Романовскому [ 2 ]. Для молекулярных исследований мононуклеарные лейкоциты выделяли из цельной венозной крови путем центрифугирования на градиенте плотности Ficoll-Paque (=1,077 г/см3, «Pharmacia», Швеция) [12]. Концентрацию проапоптотического белка caspase-3 и антиапоптотического белка Bcl-2 определяли в лизате лимфоцитов методом иммуноферментного анализа с использованием наборов Human Caspase-3 instant ELISA и Human Bcl-2 ELISA фирмы «Bender MedSystems GmbH» (Вена, Австрия). Результаты и обсуждение. Анализ полученных данных свидетельствует о том, что при заражении животных гельминтами и в процессе хронизации гельминтозных процессов на протяжении 8 недель происходят достоверно значимые изменения в общем числе лейкоцитов, общем количестве лимфоцитов и количестве лимфоцитов с морфологическими признаками апоптоза, а также в уровнях проапоптотического белка caspase-3 и антиапоптотического белка Bcl-2. В результате проведенного комплексного исследования достоверно показано, что у животных от начала заражения до хронической стадии гельминтозного процесса наблюдается постепенное и значительное повышение апоптотической активности лимфоцитов на рецепторном и клеточном уровнях. Это проявляется в повышении содержания количества лимфоцитов с морфологическими признаками апоптоза на фоне увеличения уровня проапоптотического белка caspase-3 и снижения уровня антиапоптотического белка Bcl-2.

гельминтозы, иммунитет, иммунодепрессия, апоптоз лимфоцитов, индукторы и ингибиторы апоптоза, helminthiasis, immunity, immunosuppression, apoptosis of lymphocytes, inductors and inhibitors of apoptosis

1. Бекиш В.Я., Дурнев А.Д. Генотоксическое и цито-токсическое воздействия белковых соматических продуктов гельминтов на лимфоциты крови доноров in vitro // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2004. - Т. 138, № 8. - С. 198-201.

2. Рябыкина Н. В. Исследование апоптоза клеток белой крови и изменение лейкоцитарной формулы у старых самцов мышей при действии гипогидратационного стресса и α- токоферолацетата // Молодой ученый. - 2010. - №12. Т.1. - С. 57-59.

3. Фильченков, А.А. Апоптоз и рак / А.А. Фильченков, Р.С. Стойка // Киев: Морион. 1999. - 184 с.

4. Ярилин А.А. Иммунология: учебник. 2010. - 752 с.: ил.

5. Alam M. S., Chowdhury M. A. Z., Khaliq Q. A., Yasmin S. Stability analysis for seed yield and its components in soybean (Glycýne max (L.) Merrill). Annals of Bangladesh Agriculture, 1999, no. 9, pp. 43-48.

6. Bekish V.J. The alterations in genetic apparatus of somatic and generative cells of the host caused by helminthes metabolites. Wiadomosci Parazytologiczne (Poland), 2001, vol. 47, no. 4, pp. 891-896.

7. Chow S.C., Brown A., Pritchard D. The human hookworm pathogen Necator americanus induces apoptosis in T lymphocytes. Parasite Immunology, 2000, vol. 22, pp. 29-37.

8. Eymin В., Claverie P. Salon C. PI4arf Triggers G2 Arrest through. Oncogene, 1999, vol. 18, pp. 1411-1418.

9. Estaquier J., Marguerite M., Sahuc F. Interleukin 10-mediated T cell apoptosis during the T helper type 2 cytokine response in murine Schistosoma mansoni parasite infection. Eur. Cytokine Netw., 1997, vol. 8, pp. 153-160.

10. Fadeel, B., Orrenius S., Zhivotovsky B. Apoptosis in human disease: a new skin for the old ceremony?” Biochem Biophys Res Commun., 1999, vol. 266, no.3, pp. 699-717.

11. Fallon P.G., Smith P., Dunne D.W. Type 1 type 2 cytokine producing mouse CD4+ and CD8+ cells in acute Schistosoma mansoni infection. Eur. J. Immunol., 1998, vol. 28, pp. 1408-1416.

12. Fernando H.C., Luketich J.D., Christie N.A., Ikramuddin S., Schauer P.R. Outcomes of laparoscopic Toupet compared to laparoscopic Nissen fundoplication. Surg. Endose., 2002, vol.1, pp. 905-908.

13. Gondal, M.A., Laser photoacoustic spectrometer for remote monitoring of atmospheric pollutants, Applied Optics, 1997, vol. 36, no. 15ISSN: 1559-128X (print) ISSN: 2155-3165 (online)

14. Kennedy P. M., Lowry, J. B., Conlan, L. L., Isolation of grass cell walls as neutral detergent fibre increases their fermentability for rumen micro-organisms. J. Sci. Food Agric., 1999, vol. 79, no. 4, pp. 544-548.

15. Los M., Stroh C., Jänicke R.U. Caspases: more than just killers? Trends Immunol., 2001, vol. 22, no. 1, pp. 31-34.

16. Lundy S.K., Lerman S.P., Boros D.L. Soluble egg antigen-stimulated T helper lymphocyte apoptosis and evidence for cell death mediated by FasL+ T and B cells during murine Schistosoma mansoni infection. Infection and Immunity, 2001, vol. 69, no. 1, pp. 271-280.

17. Robertson J.D., Orrenius S., Zhivotovsky B.J. Struct. Biol., 2000, no.129, pp. 346-358.

18. Rumbley C.A., Zekavat S.A., Sugaya H. The schistosome granulema: characterization of lymphocyte migration, activation and cytokine production. J. Immunol. 1998, vol. 161, pp. 4129- 4137.

19. Tato P., Fernandez A.M., Solano S. A cysteine protease from Taenia solium metacestodes induce apoptosis in human CD4+ T-cells. Parasitol. Res., 2004, vol. 92, no. 3, pp. 197-204.

20. Zhou D., Lambert, S., Malen P.L., Carpenter S., Boland L.M., Bennett V. J. Cell Biol., 1998, no. 143, pp.1295-1304.

21. Zhang J, Rosenberg HF, Nei M. Positive Darwinian selection after gene duplication in primate ribonuclease genes. Proceedings of the National Academy of Sciences (USA), 1998, no. 95, pp. 3708-3713.