ГЕНОТОКСИЧЕСКИЕ И ЦИТОТОКСИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ В КЛЕТКАХ ХОЗЯИНА ПРИ ТЕНИИДОЗАХ

Цель  исследований  –  изучение состояния уровней возможных первичных повреждений ДНК соматических и генеративных клеток хозяина при инвазиях свиным и бычьим цепнями на имагинальной стадии развития, а также при сенсибилизации белковыми соматическими продуктами из тканей тениид в зависимости от дозы их введения. Материалы и методы.  Исследования по изучению  влияния инвазии свиным или бычьим цепнями на соматические и генеративные клетки хозяина были проведены на 15 золотистых хомяках-самцах,  разделенных  на 3 группы. Первая служила незараженным контролем, животные  второй  и третьей  инвазированы  соответственно  Taenia  solium  и  T.  saginatus  в дозе  по 20 цистицерков  на голову.  Щелочной гель-электрофорез изолированных клеток костного мозга и семенников у животных всех групп проводили на 45-е сутки от начала опыта. Интенсивность инвазий определяли путем подсчета паразитов в тонком кишечнике.  Изучение возможных генотоксического и цитотоксического эффектов в геноме млекопитающих при трехкратной подкожной сенсибилизации белковыми соматическими продуктами  (БСП)  из тканей половозрелых паразитов  T.  solium  и  T. saginatus проводили на 35 мышах-самцах, которых разделили на 3 группы аналогично предыдущему опыту.  Мышам контрольной группы вводили трехкратно подкожно во внутреннюю  поверхность бедра по 0,2 мл 0,9%-ного раствора хлорида натрия. Животным второй и третьей групп  вводили трехкратно подкожно во внутреннюю поверхность бедра БСП  T.  solium  или БСП  T.  saginatus  из расчета 200, 400 или 800 мкг/г массы тела животного соответственно. Учет изменений щелочного гель-электрофореза отдельных клеток в клетках костного мозга и семенников сенсибилизированных животных  осуществляли на 4-е  сутки  от первого введения паразитарного продукта. Концентрацию общего белка в БСП определяли биуретовым методом. Повреждения молекулы ДНК при щелочном гель-электрофорезе  изолированных клеток  анализировали с использованием  программы «СASP  v. 1.2.2». Из каждого микропрепарата подсчитывали  по 100 клеток,  в каждой из которых учитывали «длину хвоста»  кометы в пикселях, а также процент  ДНК в «хвосте». В качестве показателя генотоксического воздействия факторов среды использовали «момент хвоста», вычисленный из «длины хвоста», умноженной на процент ДНК в «хвосте». Для оценки цитотоксического воздействия метаболитов гельминтов и их паразитарных продуктов на клетки костного мозга, семенников животных в 100 случайно выбранных клетках определяли процент апоптотических, изображения которых характеризуют минимальные размеры ядра и большой хвост, разбросанный во все стороны. Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием программ Statistica 5.0. и Excel 2002.  Результаты и  обсуждение.  Установлено, что трехкратная подкожная сенсибилизация белковыми соматическими продуктами из тканей  T.  solium  и  T.  saginatus  сопровождается генотоксическим эффектом в соматических клетках костного мозга и генеративных клетках семенников мышей линии СВА, который характеризуется ростом одноцепочечных разрывов и щелочно-лабильных сайтов ядерной ДНК клеток. Рост повреждений ядерной молекулы ДНК клеток зависит от дозы белкового соматического продукта из тканей  T.  saginatus  и достоверно возрастает при ее увеличении. Белковые соматические продукты из тканей  T.  solium  и  T.  saginatus  при трехкратной подкожной сенсибилизации проявляют цитотоксическое воздействие в виде роста апоптотических клеток костного мозга и семенников. Белковый соматический продукт из тканей T. saginatus обладает дозозависимым цитотоксическим воздействием. 

1. Астафев Б. А., Яротский Л. С., Лебедева М. Н. Экспериментальные модели паразитозов в биологии и медицине. – М.: Наука, 1989. – 279 с.

2. Бекиш В. Я. Мутагенная активность антигенов из тканей аскарид // Здравоохранение. – 1999. – № 6. – С. 17–19.

3. Бекиш В. Я., Бекиш О.-Я. Л. Состояние генома хозяина при гельминтозах. – Витебск: Изд. ВГМУ, 2004. – 218 с.

4. Морозова Н. А., Барышникова Т. А. Определение белка в моче биуретовым методом // Лабораторное дело. – 1991. – № 2. – С. 23–25.

5. Дырнев А. Д. Применение метода щелочного гель-электрофореза изолированных клеток для оценки генотоксических свойств природных и синтетических соединений. Методические рекомендации. Утв. РАМН и РАСН. – М., 2006. – 27 с.

6. Hellman B., Vaghef H., Friis L., Edling C. Alkaline single cell gel electrophoresis of DNA fragments in biomonitoring for genotoxicity: an introductory study on healthy human volunteers // Int. Arch. Occup. Environ. Health. – 1997. – Vol. 69. – P.185–192.

7. Herrera L. A. et al. Immune response impairment, genotoxicity and morphological transformation induced by Taenia solium metacestode // Mutat. Res. – 1994. – Vol. 305. – P. 223–228.

8. Montero R., Ostrowsky P. Genotoxic activity of Praziquantel // Rev. in Mutat. Res. – 1997. – Vol. 387. – P. 123–139.

9. Herrera L. A. et al. Possible association between Taenia solium cysticercosis and cancer: increased frequency of DNA damage in peripheral lymphocytes from neurocysticercosis patients // Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. – 2000. – Vol. 94, № 1. – P. 61–65.

10. Flisser A. et al. Praziquantel treatment of brain and muscle porcine Taenia solium cysticercosis // Parasitol. Res. – 1990. – Vol. 76. – P. 640–642.

11. Serrano–Garcia L., Montero–Montoya R. Micronuclei and chromatid buds are the result of related genotoxic events // Mutat. Res. Envir. and Mol. Mutagen. – 2001. – Vol. 38. – P. 38–45.

12. Singh N., McCoy M., Tice R., Schneider E. A simple technique for quantification of low levels of DNA damage in individual cells // Exp. Cell Research. – 1988. – Vol. 175. – P.184–191.