Быстрое выявление сосновой стволовой нематоды Bursaphelenchus xylophilus в древесине в полевых условиях

Цель исследований – проведение апробации прибора «EmDEA» для выявления нематод B. xylophilus при различных вариантах отбора проб.

Материалы и методы. Портативный прибор «EmDEA» предназначен для выявления организмов в полевых условиях, и его работа основана на ферментативно-опосредованной дуплексной экспоненциальной амплификации, что позволяет выявить нематод Bursaphelenchus xylophilus в древесной пробе в течение 20-30 мин. Первый тест включал варианты, где в пробирки вносили по 3, 5, 10 и 20 нематод в разных вариантах совместно с чистыми древесными опилками. Во втором тесте использовали зараженную B. xylophilus древесину сосны (Pinus sylvestris).

Результаты и обсуждение. Национальными организациями по защите растений проводится постоянный мониторинг в лесах и импортируемых древесных грузах на зараженность опасным карантинным видом нематоды B. xylophilus, поэтому применение быстрого надежного метода по выявлению этого организма в древесине является актуальной задачей. Авторами статьи протестирован прибор «EmDEA», позволяющий выявлять B. xylophilus в полевых условиях. Степень выявления нематод в I тесте в вариантах при 3, 5, 10 и 20 нематодах в пробирке составила, соответственно, 29%, 79, 64 и 71%. Степень выявления нематод во II тесте составила 29–79% при 1–3 особей нематод в древесной пробе и 100% – при 4 особях. Портативный прибор «EmDEA» показал высокую чувствительность в отношении выявления и диагностики нематод B. xylophilus и может быть применен при обследовании лесов и проведении карантинного контроля в международной торговле.

1. Кулинич О. А., Арбузова Е. Н., Чалкин А. А., Козырева Н. И., Рысс А. Ю. Распространение сосновой стволовой нематоды Bursaphelenchus xylophilus в мире и результаты обследования хвойных насаждений в Российской Федерации // «Современные проблемы лесозащиты и пути их решения»: материалы II Международной научно-практической конференции. Минск: БГТУ, 2020. С. 363–367.

2. Кулинич О. А., Ряскин Д. И., Арбузова Е. Н., Козырева Н. И. Инвазионные вредители, угрожающие лесным экосистемам особо охраняемых природных территорий // Фитосанитария. Карантин растений. 2025. № 2S (23A). С. 56–57. https://doi.org/10.69536/FKR.2025.75.88.001

3. Чалкин А. А., Арбузова Е. Н., Козырева Н. И., Кулинич О. А. Оптимальные параметры выделения нематод из древесного субстрата // Российский паразитологический журнал. 2025. Т. 19, № 4. С. 490–499. https://doi.org/10.31016/1998-8435-2025-19-4-490-499

4. Arbuzova E. N., Karagyan G. H., Kozyreva N. I., Shchukovskaya A. G., Ghrejyan T. L., Kalashian M. Yu., Akopyan K. V. First finding of Bursaphelenchus xylophilus in pine plantations of the Republic of Armenia. Journal оf Nematology. 2025; 51 (1). https://doi.org/10.2478/jofnem-2025-0004

5. Bonifácio L., Naves P., Sousa E. Vector-plant. In: Sousa E, Vale I, Abrantes I (eds) Pine wilt disease in Europe biological interactions and integrated management. FNAPF–Federação Nacional das Associações de Proprietários Florestais. Lisbon, 2015; 123–158.

6. Cardoso J. M. S., Fonseca L., Abrantes I. Direct molecular detection of the pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, from pine wood, bark and insect vector. European Journal of Plant Pathology. 2012; 133: 419–425. https://doi.org/10.1007/s10658011-9915-y

7. Evans H. F., Kulinich O., Magnusson C., Robinet C. Schroeder T. Report of a pest risk analysis for Bursaphelenchus xylophilus. EPPO (European and Mediterranean Plant Protection Organization). 2009; 17. https://gd.eppo.int/download/doc/332_pra_full_BURSXY.pdf

8. Faria J. M. S., Sousa E., Bonifácio L., Carrasquinho I., Varela A. R., Inácio M. L. Bursaphelenchus. In: Compendium of Phytopathogenic Microbes in AgroEcology. N. Amaresan, K. Kumar (eds.), 2025; 353–386. https://doi.org/10.1007/978-3-031-81999-5_19

9. Filipiak A., Wieczorek P., Tomalak M. A fast and sensitive multiplex real-time PCR assay for simultaneous identification of Bursaphelenchus xylophilus, B. mucronatus and B. fraudulentus – three closely related species from the xylophilus group. European Journal of Plant Pathology. 2019; 155: 239–251. https://doi.org/10.1007/s10658-019-01767-2

10. Futai K. Pine wilt in Japan: from first incidence to the present. In: Zhao B.G., Futai K., Sutherland J.R, Takeuchi Y. (eds) Pine wilt disease. Springer Japan, Tokyo. 2008; 5–12. https://doi.org/10.1007/978-4431-75655-2_2

11. Gu J., Wang J., Braasch H, Burgermeister W., Schröder T. Morphological and molecular characterisation of mucronate isolates (‘M’ form) of Bursaphelenchus xylophilus (Nematoda: Аphelenchoididae). Russian Journal of Nematology. 2011; 19: 103–120.

12. Guo K., Ma X., Fang Y., Duan W., Wu Y., Hu Z., Ye W., Gu J. A Fast and Sensitive Enzyme-Mediated Duplex Exponential Amplification Method for Field Detection of Bursaphelenchus xylophilus. Horticulturae. 2025; 11: 602 https://doi.org/10.3390/horticulturae11060602

13. Kantor M., Subbotin S. A. Rapid detection of the beech leaf nematode, Litylenchus crenatae using recombinase polymerase amplification assay with lateral fl ow dipsticks. PLoS One. 2026; 21 (2): e0341967. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0341967

14. Kulinich O. Surveys for the pine wood nematode in Russia. In: The Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus. Nematology Monographs and Perspectives 1. Ed. by Mota, M., Vieira P. The Netherlands: Brill, Leiden, 2004; 187–197. https://doi.org/10.1163/9789047413097_011

15. Mota M., Braasch H., Bravo M. A., Penas A. C., Burgermeister W., Metge K., Sousa E. First report of Bursaphelenchus xylophilus in Portugal and in Europe. Nematology. 1999; 1: 727–734. https://doi.org/10.1163/156854199508757

16. Shin S-C. Pine wilt disease in Korea. In: Zhao B.G., Futai K., Sutherland J.R., Takeuchi Y. (eds) Pine wilt disease. Springer Japan, Tokyo, 2008; 26–32. https://doi.org/10.1007/978-4-431-75655-2_5

17. Sun Y. Z., Wang C., Wang D. Z., Bao Y. S., Zhu L., Xia H. M. A portable microfl uidic system for Bursaphelenchus xylophilus detection. Journal of Plant Diseases and Protection. 2025; 132: 72. https://doi.org/10.1007/s41348-025-01065-6

18. Sutherland J. R. A brief overview of the pine wood nematode and pine wilt disease in Canada and the United States. In: Zhao B., Futai K., Sutherland J., Takeuchi Y. (eds) Pine Wilt Disease. Springer, Japan, 2008; 13–25. https://doi.org/10.1007/978-4-431-75655-2_3

19. Togashi K. Vector-nematode relationship and epidemiology in pine wilt disease. In: Zhao B., Futai K., Sutherland J., Takeuchi Y. (eds) Pine Wilt Disease. Springer, Japan, 2008; 162–184. https://doi.org/10.1007/978-4-431-75655-2_17

20. Tramontini S., Gilioli G., Sciandra C., Paoli F., Baldassarre F., Scala M., Sánchez B., Nougadère A., Vos S. Bursaphelenchus xylophilus – Pest Report to support the ranking of EU candidate priority pests. EFSA (European Food Safety Authority), EFSA supporting publication. 2025; 22 (3): 9323E. https://doi.org/10.2903/sp.efsa.2025.EN-9323

21. Zamora P., Rodríguez V., Renedo F., Sanz A. V., Domínguez J. C., Pérez-Escolar G., Miranda J., Álvarez B., González-Casas A., Mayor E., Dueñas M., Miravalles A., Navas A., Robertson L., Martín A. B. First report of Bursaphelenchus xylophilus causing pine wilt disease on Pinus radiata in Spain. Plant Dis. 2015; 99: 1449–1449. https://doi.org/10.1094/PDIS-03-15-0252-PDN

22. Zhao B. G. Pine wilt disease in China. In: Zhao B.G., Futai K., Sutherland J.R., Takeuchi Y. (eds) Pine wilt disease. Springer Japan, Tokyo, 2008; 18–25. https://doi.org/10.1007/978-4-431-75655-2_4