Оптимальные параметры выделения нематод из древесного субстрата

Цель исследований – определить оптимальные временные и температурные параметры при выделении нематод Bursaphelenchus xylophilus вороночным методом Бермана из древесины сосны Pinus sylvestris L.

Материалы и методы. Фрагменты ствола P. sylvestris длиной 22–25 см, выпиленные из 15-летнего визуально здорового дерева сосны были заражены сосновой стволовой нематодой B. xylophilus и их инкубировали в течение 45 сут в термостате при температуре 27 °С. При бурении дрелью зараженных нематодами бревен получали опилки, из которых сформировали единый образец древесного субстрата. Для выделения нематод из древесного образца использовали вороночный метод Бермана. Опыт включал четыре варианта по 8 образцов. Численность нематод определяли через 6, 24 и 48 ч при температуре 18 и 25 °С. Данные обрабатывали в среде MS Excel.

Результаты и обсуждение. Установлено, что около 80% нематод выделяется в течение первых 24 ч. Этот срок является оптимальным при проведении фитогельминтологического анализа. Число выделенных нематод в последующие сутки составило около 20%. Изменение температуры в пределах 18–25 °С влияло на степень экстракции нематод из древесного субстрата, но не всегда существенно. Численность выделенных нематод в различных воронках, полученных из одного смешанного образца, существенно различалась, что объясняется агрегированностью их распределения в древесном субстрате.

1. Ахматович Н. А., Рысс А. Ю. Пути распространения стволовых нематод рода Bursaphelenchus группы видов xylophilus с пиломатериалами на территории Российской Федерации // Паразитология. 2009. Т. 43, № 6. С. 437–444.

2. Кирьянов Е. С., Кралль Э. Л. Паразитические нематоды растений и меры борьбы с ними. Л.: Наука, 1969. T. 1. 447 с.

3. Кудрин А. А., Сущук А. А. Методы исследования сообществ почвенных нематод. Russian Journal of Ecosystem Ecology. 2022. Т. 7, № 2. С. 44–71. https://doi.org/10.21685/2500-0578-2022-2-5

4. Кулинич О. А. Методические указания по выявлению, определению паразитических нематод лесных древесных пород и методы защиты от них. М., 1990. 70 с.

5. Кулинич О. А., Арбузова Е. Н., Чалкин А. А., Козырева Н.И., Рысс А. Ю. Распространение сосновой стволовой нематоды Bursaphelenchus xylophilus в мире и результаты обследования хвойных насаждений в Российской Федерации. «Современные проблемы лесозащиты и пути их решения»: материалы II Международной научно-практической конференции, посвященной 95-летию со дня рождения проф. Н. И. Федорова и 90-летию кафедры лесозащиты и древесиноведения. Минск: БГТУ, 2020. С. 363–367.

6. Таболин С. Б., Романенко Н. Д., Митюшев И. М. Агронематология: Учебное пособие / Под общ. ред. С. Б. Таболина. М.: Изд. ЗГАУ-МСХА, 2017. 200 с.

7. Чалкин А. А., Зинников Д. Ф., Лябзина С. Н., Синкевич О. В. Вредители и болезни лесных биоценозов особо охраняемых природных территорий Республики Карелии // Фитосанитария. Карантин растений. 2021. № 2. С. 9-19. https://doi.org/10.69536/FKR.2021.30.26.001

8. Чалкин А. А., Козырева Н. И., Кулинич О. А., Арбузова Е.Н. Нематоды-ксилобионты, ассоциированные с короедами рода Ips De Geer, 1775 // Фитосанитария. Карантин растений. 2024. S4-1 (20). С. 85.

9. Шестеперов А. А., Лычагина С. В., Щитков Г. С. К эпифитотическому процессу при бурсафеленхозе (Bursaphelenchus mucronatus) сосны обыкновенной // Российский паразитологический журнал. 2024. Т. 18, № 4. С. 463–474. https://doi.org/10.31016/1998-8435-2024-18-4-463-474

10. Шестеперов А. А., Савотиков Ю. Ф. Карантинные фитогельминтозы. Кн. 1. М.: Колос, 1995. 463 с.

11. Arbuzova E. N., Karagyan G. H., Kozyreva N. I., Shchukovskaya A. G., Ghrejyan T. L., Kalashian M. Y., Akopyan K. V. First finding of Bursaphelenchus xylophilus in pine plantations of the Republic of Armenia. Journal of Nematology. 2025; 57 (1): 20250004. https://doi.org/10.2478/jofnem-2025-0004

12. Baermann G. Eine einfache Methode zur Auffindung von Anklostomum (Nematoden) Larven in Erdproben. Tijdschr Diergeneeskd. 1917; 57: 131–137.

13. Cesarz S., Schulz A. E., Beugnon R., Eisenhauer N. Testing soil nematode extraction efficiency using different variations of the Baermann-funnel method. Soil organisms. 2019; 91: 61–72. https://doi.org/10.25674/so91201

14. De la Fuente B., Saura S. Long-term projections of the natural expansion of the pine wood nematode in the Iberian Peninsula. Forests. 2021; 12 (7): 849. https://doi.org/10.3390/f12070849

15. EPPO. Bursaphelenchus xylophilus. EPPO Global Database. https://gd.eppo.int/taxon/BURSXY/categorization. Accessed 28 May 2025

16. EPPO. PM 7/119 (1) Nematode extraction. Bulletin OEPP/EPPO Bulletin. 2013; 43: 471–495. https://doi.org/10.1111/epp.12077

17. Futai K. Pine wilt disease and the decline of pine forests: a global issue. Cambridge Scholars Publishing, 2021; 201.

18. Hallman J., Viaene N. PM 7/119 (1) Nematode extraction. EPPO Bulletin. 2013; 43: 471–495.

19. Kulinich O.A., Kruglic I., Eroshenko A.S., Kolosova N.V. Occurrence and distribution of the nematode Bursaphelenchus mucronatus in the Russian Far East. Russian Journal of Nematology. 1994; 2 (2): 113–120.

20. Mota M., Braasch H., Bravo M. A., Penas A. C., Burgermeister W., Metge K., Sousa E. First report of Bursaphelenchus xylophilus in Portugal and in Europe. Nematology. 1999; 1: 727–734.

21. Robinson, A. F., Heald C. M. Accelerated movement of nematodes from soil in Baermann funnels with temperature gradients. Journal of Nematology. 1989; 21: 370–378.

22. Rodrigues J. M., Sousa E., Abrantes I. Pine wilt disease: historical everview. In Pine wilt disease in Europe: Biological interactions and integrated management (Sousa E.; Vale F., Abrantes I. Eds.) Lisboa. FNAPF-Federação Nacional das Associações de Proprietários Florestais. 2015; 13–32.

23. Schröder T., McNamara D. G., Gaar V. Guidance on sampling to detect pine wood nematode Bursaphelenchus xylophilus in trees, wood and insects. EPPO Bulletin. 2009; 39 (2): 179–188. https://doi.org/10.1111/j.1365-2338.2009.02287.x

24. Sutherland J. R. A brief overview of the pine wood nematode and pine wilt disease in Canada and the United States. In: Pine wilt disease. (Zhao B.G., Futai K., Sutherland J.R., Takeuchi Y. Еds.) Tokyo. Springer, 2008; 13–17. https://doi.org/10.1007/978-4-431-75655-2_3

25. Zamora P., Rodríguez V., Renedo F., Sanz A. V., Domínguez J. C., Pérez-Escolar G., & Martín A. B. First report of Bursaphelenchus xylophilus causing pine wilt disease on Pinus radiata in Spain. Plant Disease. 2015; 99 (10): 1449-1449. https://doi.org/10.1094/PDIS-03-15-0252-PDN