МОЛЕКУЛЯРНАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ ИЗОЛЯТОВ Anaplasmamarginale, ОБНАРУЖЕННЫХ В КРОВИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА НА ТЕРРИТОРИИ МОСКОВСКОЙ ОБЛАСТИ

Цель исследования - выявить и идентифицировать с помощью молекулярно-генетических методов изоляты Anaplasma marginale, циркулирующие на территории Московской области. Материалы и методы. Образцы крови крупного рогатого скота были отобраны в 2015 г. на территории Московской области. ДНК выделяли из цельной крови с помощью набора Sorb-M. Выявление животных, инфицированных A. marginale , и оценку уровня паразитемии проводили методом ПЦР в реальном времени, разработанным нами ранее. Типирование штаммов A. marginale осуществляли на основе метода с модификацией в части структуры праймеров. Полученные фрагменты гена были клонированы в клетках Escherichia сoli . Поиск целевых рекомбинантных клонов E. coli проводили методом ПЦР с использованием стандартных праймеров M13 с последующим анализом продуктов реакции электрофорезом в 1,5%-ном агарозном геле. Результаты и обсуждение. Показано, что семь из тридцати исследованных животных являлись носителями A. marginale с уровнем паразитемии в пределах 3,6 × 10³-5,4 × 10⁵ на 1мл крови. Типирование обнаруженных изолятов на основе нуклеотидных последовательностей гена msp4 выявило их принадлежность к двум уже известным генотипам. Полученные результаты могут быть использованы при проведении эпидемиологического мониторинга анаплазмоза на территории Московской области, а также учитываться при разработке вакцин.

анаплазмоз, Anaplasma marginale, крупный рогатый скот, ПЦР, паразитемия, генотипирование, anaplasmosis, Anaplasma marginale, cattle, PCR, parasitemia, genotyping

1. Василевич Ф. И., Белименко В. В., Гулюкин М. И., Георгиу Х. Практическое руководство по борьбе с кровепаразитарными болезнями домашних животных. - М.: ЗооВетКнига, 2015. - С. 86.

2. Георгиу Х., Белименко В. В. Современные лабораторные методы диагностики анаплазмоза крупного рогатого скота и овец // Рос. вет. журнал. С/х животные. - 2014. - № 3. - С. 31-32.

3. Гулюкин М. И., Заблоцкий В. Т., Белименко В. В., Христиановский П. И., Саруханян А. Р. Кровепаразитарные болезни домашних животных (Атлас). - М.: ЗооВетКнига, 2013. - С. 86.

4. Гулюкин М. И., Заблоцкий В. Т., Белименко В. В. Мониторинг эпизоотической ситуации по протозойным кровепаразитарным болезням домашних животных в Российской Федерации (2007-2012) // Рос. вет. журнал. С/х животные. - 2013. - № 2. - С. 36-40.

5. Казаков Н. А. Минимальная заражающая доза возбудителей (A. marginale, A. ovis) при анаплазмозе КРС и овец критерий объективной оценки иммуногенных свойств противоанаплазмозных адьювантных инактивированных эмульгированных вакцин // Ветеринарная патология. - 2008. - № 2. - С. 68-70.

6. Ковальчук С. Н., Косовский Г. Ю., Архипов А. В., Глазко Т. Т., Глазко В. И. Разработка метода выявления Anaplasma marginale с использованием ПЦР в реальном времени // Сельскохозяйственная биология. 2015.- Т. 50, № 6. - С. 825-831.

7. Dark M. J., Herndon D. R., Kappmeyer L. S., Gonzales M. P., Nordeen E., Palmer G. H. Conservation in the face of diversity: multistrain analysis of an intracellular bacterium. BMC Genomics, 2009, vol. 10, p.16.

8. Fuente J., Van Den Bussche R. A., Kocan K. M. Molecular phylogeny and biogeography of North American isolates of Anaplasma marginale (Rickettsiaceae: Ehrlichieae). Veterinary parasitology, 2001, vol. 97, pp. 65-76.

9. Fuente J., Passos L. M., Van Den Bussche R. A., Ribeiro M. F., Facury-Filho E. J., Kocan K. M. Genetic diversity and molecular phylogeny of Anaplasma marginale isolates from Minas Gerais, Brazil. Vet. Parasitol., 2004, vol. 121 (3-4), pp. 307- 316.

10. Fuente J., Lew A., Lutz H., Meli M. L., Hofmann-Lehmann R., Shkap V. Genetic diversity of Anaplasma species major surface proteins and implications for anaplasmosis serodiagnosis and vaccine development. Anim. Health Res. Rev., 2005, vol. 6, pp. 75-89.

11. Fuente J., Rubial P., Mtshali M. S., Naranjo V., Shuqing L., Mangold A. J. Analysis of world strains of Anaplasma marginale using major surface protein 1a repeat sequence. Vet. Microbiol., 2006, vol. 119, pp. 382-390.

12. Guglielmone A. A. Epidemiology of babesiosis and anaplasmosis in South and Central America. Vet. Parasitol., 1995, vol. 57, pp. 109-119.

13. Hornok S., Foldvari G., Elek V., Naranjo V., Farkas R., de la Fuente J. Molecular identification of Anaplasma marginale and rickettsial endosymbionts in blood-sucking flies (Diptera: Tabanidae, Muscidae) and hard ticks (Acari: Ixodidae). J. Vet. Parasitol., 2008, vol. 154 (3-4), pp. 354-359.

14. Kocan K. M., Blouin E. F., Barbet A. F. Anaplasmosis control: past, present and future. Ann. N. Y. Acad. Sci., 2000, vol. 916, pp. 501-509.

15. Kocan K. M., Fuente J., Blouin E. F., Coetzee J. F., Ewing S. A. The natural history of Anaplasma marginale. Vet. Parasitol., 2010, vol. 167, pp. 95-107.

16. Ogata H., Audic S., Renesto-Audiffren P., Fournier P. E., Barbe V., Samson D., Roux V., Cossart P., Weissenbach J., Claverie J. M., Raoult D. Mechanisms of evolution in Rickettsia conorii and R. prowazekii. Science, 2001, vol. 293, pp. 2093-2098.

17. Wall D. T. Anaplasmosis control and diagnosis in South Africa. Ann N. Y. Acad. Sci., 2000, no 916, p. 474-83.