MOLECULAR IDENTIFICATION OF ISOLATES ANAPLASMA MARGINALE FOUND IN BLOOD OF CATTLE ON THE TERRITORY OF MOSCOW REGION

Objective of research: To detect and identify by molecular and genetic methods isolates Anaplasma marginale circulating on the territory of Moscow region. Materials and methods: Blood samples were taken from cattle on the territory of Moscow region in 2015. DNA was isolated from whole blood by the kit «Sorb-M». Identification of animals infected with A. marginale and estimation of the parasitemia level were carried out by real-time PCR methods. Typing of A. marginale strains was performed by modifying the primer structure. The received gene fragments were cloned in Escherichia сoli cells. Targeted selection of recombinant clones of E. coli was conducted by PCR methods using standard primers M13 with the following analysis of reaction products by 1,5% agarose gel electrophoresis. Results and discussion: It was shown that seven of thirty animals were carriers of A. marginale strains; levels of parasitemia range from 3,6 × 103 to 5,4 × 105 per 1 ml blood. The analysis of msp4 gene sequence of A. marginale isolates shows their belonging to two already known genotypes. The results obtained can be used for epidemiological monitoring of anaplasmosis on the territory of Moscow region as well as taken into account for development of vaccines.

анаплазмоз, Anaplasma marginale, крупный рогатый скот, ПЦР, паразитемия, генотипирование, anaplasmosis, Anaplasma marginale, cattle, PCR, parasitemia, genotyping

1. Василевич Ф. И., Белименко В. В., Гулюкин М. И., Георгиу Х. Практическое руководство по борьбе с кровепаразитарными болезнями домашних животных. - М.: ЗооВетКнига, 2015. - С. 86.

2. Георгиу Х., Белименко В. В. Современные лабораторные методы диагностики анаплазмоза крупного рогатого скота и овец // Рос. вет. журнал. С/х животные. - 2014. - № 3. - С. 31-32.

3. Гулюкин М. И., Заблоцкий В. Т., Белименко В. В., Христиановский П. И., Саруханян А. Р. Кровепаразитарные болезни домашних животных (Атлас). - М.: ЗооВетКнига, 2013. - С. 86.

4. Гулюкин М. И., Заблоцкий В. Т., Белименко В. В. Мониторинг эпизоотической ситуации по протозойным кровепаразитарным болезням домашних животных в Российской Федерации (2007-2012) // Рос. вет. журнал. С/х животные. - 2013. - № 2. - С. 36-40.

5. Казаков Н. А. Минимальная заражающая доза возбудителей (A. marginale, A. ovis) при анаплазмозе КРС и овец критерий объективной оценки иммуногенных свойств противоанаплазмозных адьювантных инактивированных эмульгированных вакцин // Ветеринарная патология. - 2008. - № 2. - С. 68-70.

6. Ковальчук С. Н., Косовский Г. Ю., Архипов А. В., Глазко Т. Т., Глазко В. И. Разработка метода выявления Anaplasma marginale с использованием ПЦР в реальном времени // Сельскохозяйственная биология. 2015.- Т. 50, № 6. - С. 825-831.

7. Dark M. J., Herndon D. R., Kappmeyer L. S., Gonzales M. P., Nordeen E., Palmer G. H. Conservation in the face of diversity: multistrain analysis of an intracellular bacterium. BMC Genomics, 2009, vol. 10, p.16.

8. Fuente J., Van Den Bussche R. A., Kocan K. M. Molecular phylogeny and biogeography of North American isolates of Anaplasma marginale (Rickettsiaceae: Ehrlichieae). Veterinary parasitology, 2001, vol. 97, pp. 65-76.

9. Fuente J., Passos L. M., Van Den Bussche R. A., Ribeiro M. F., Facury-Filho E. J., Kocan K. M. Genetic diversity and molecular phylogeny of Anaplasma marginale isolates from Minas Gerais, Brazil. Vet. Parasitol., 2004, vol. 121 (3-4), pp. 307- 316.

10. Fuente J., Lew A., Lutz H., Meli M. L., Hofmann-Lehmann R., Shkap V. Genetic diversity of Anaplasma species major surface proteins and implications for anaplasmosis serodiagnosis and vaccine development. Anim. Health Res. Rev., 2005, vol. 6, pp. 75-89.

11. Fuente J., Rubial P., Mtshali M. S., Naranjo V., Shuqing L., Mangold A. J. Analysis of world strains of Anaplasma marginale using major surface protein 1a repeat sequence. Vet. Microbiol., 2006, vol. 119, pp. 382-390.

12. Guglielmone A. A. Epidemiology of babesiosis and anaplasmosis in South and Central America. Vet. Parasitol., 1995, vol. 57, pp. 109-119.

13. Hornok S., Foldvari G., Elek V., Naranjo V., Farkas R., de la Fuente J. Molecular identification of Anaplasma marginale and rickettsial endosymbionts in blood-sucking flies (Diptera: Tabanidae, Muscidae) and hard ticks (Acari: Ixodidae). J. Vet. Parasitol., 2008, vol. 154 (3-4), pp. 354-359.

14. Kocan K. M., Blouin E. F., Barbet A. F. Anaplasmosis control: past, present and future. Ann. N. Y. Acad. Sci., 2000, vol. 916, pp. 501-509.

15. Kocan K. M., Fuente J., Blouin E. F., Coetzee J. F., Ewing S. A. The natural history of Anaplasma marginale. Vet. Parasitol., 2010, vol. 167, pp. 95-107.

16. Ogata H., Audic S., Renesto-Audiffren P., Fournier P. E., Barbe V., Samson D., Roux V., Cossart P., Weissenbach J., Claverie J. M., Raoult D. Mechanisms of evolution in Rickettsia conorii and R. prowazekii. Science, 2001, vol. 293, pp. 2093-2098.

17. Wall D. T. Anaplasmosis control and diagnosis in South Africa. Ann N. Y. Acad. Sci., 2000, no 916, p. 474-83.