117218, Москва, ул. Б. Черемушкинская, 28
28, B. Cheremushkinskaya street, Moscow, Russia, 117218
Цель исследований: изучить распространение описторхоза у непромысловых рыб в реках и озерах Тверской, Московской, Калужской и Ярославской областей. Отработать комплексный подход при диагностике описторхоза, применяя морфологические, молекулярно-генетические методы и метод биологической пробы.
Материалы и методы. Работу выполняли в 2014–2018 гг. Всего было исследовано 90 экз. непромысловой рыбы, добытой любительским методом вылова, в трех реках и трех озерах центральной России. Метацеркарий выделяли при помощи переваривания мышц рыбы в искусственном желудочном соке в лаборатории санитарной паразитологии ВНИИП. Для дифференциальной диагностики метацеркарий трематод в работе применяли комплексный подход, используя методы морфологического определения при помощи светового микроскопа и специальной литературы, биологической пробы в условиях вивария на золотистых хомяках и при помощи полимеразной цепной реакции (ПЦР) в лаборатории молекулярной биологии ВНИИП, для чего использовали ранее опубликованные видоспецифичные праймеры и стандартные коммерческие наборы для выделения и амплификации ДНК; детекцию реакции проводили в 1,5%-ном агарозном геле.
Результаты и обсуждение. По результатам проведенных исследований, плотва из реки Десна (Московская об- ласть), реки Нара (Калужская область), плотва и густера из реки Волга (Тверская область) заражены метацеркари- ями Opisthorchis felineus, что было подтверждено ПЦР. Плотва, густера и линь из Истринского водохранилища, озера Белого и озера Неро были свободны от метацеркарий O. felineus. Биологическая проба на сирийских хомяках была положительной при скармливании метацеркарий из мышц плотвы, выловленной в реке Десна Московской области. В остальных случаях биологические пробы были отрицательными, несмотря на положительную ПЦР в плотве из реки Нара и плотве и густере из реки Волга. Таким образом, в настоящее время в Центральной России имеются очаги описторхоза O. felineus на малых реках (Десна, Нара) и на реке Волге в районе Тверской области. Интенсивность инвазии у плотвы в малых реках с возрастом уменьшается и протекает в виде моноинвазии, тогда как в реке Волге плотва и густера заражены метацеркариями нескольких видов трематод, а наличие метацеркарий O. felineus в данных видах можно подтверждать при помощи ПЦР, так как биологическая проба при низких концентрациях метацеркарий описторхид мало информативна. В озере Белом на востоке Москвы плотва и линь были свободны от всех метацеркарий трематод, тогда как в Истринском водохранилище Московской области у плотвы и густеры выявляли незначительное число непатогенных для человека и плотоядных метацеркарий трематод. В озере Неро Ярославской области встречались единичные метацеркарии непатогенных трематод.
The purpose of the research is studying the expansion of opisthorchosis in non-commercial fish in the Tver, Moscow, Kaluga and Yaroslavl Region rivers and lakes. Developing a comprehensive approach in the diagnostics of opisthorchosis applying morphological, molecular and genetic methods and the bioassay method.
Materials and methods. The work was done in 2014–2018. 90 specimens of non-commercial fish were studied which were caught by recreational fishing in three rivers and three lakes of the central part of Russia. A metacercaria was divided using fish muscles digested in a simulated gastric fluid in the VNIIIP laboratory of sanitary parasitology. For a differentiated diagnostics of the metacercarias of trematodes, a comprehensive approach was applied in the work using the methods of morphology determination by a light microscope and professional literature, a method of bioassay on golden hamster in a vivarium, and by a polymerase chain reaction (PCR) in the VNIIIP laboratory of molecular biology. For this purpose, species-specific primers and standard commercial sets published earlier were used to divide and amplify a DNA. The reaction was detected in a 1.5% agarose gel.
Results and discussion. According to the results of the completed studies, the roach from the Desna River (the Moscow Region), the Nara River (the Kaluga Region), and the roach and the silver bream from the Volga River (the Tver Region) were infected with metacercarias Opisthorchis felineus, which was evidenced by the PCR. The roach, white beam and tench from the Istra Reservoir, Lake Beloye and Lake Nero were free from metacercarias O. felineus. A bioassay test on Syrian hamsters was positive when metacercarias from muscles of the roach caught in the Desna of the Moscow Region were fed off. In other cases, the bioassay tests were negative irrespective of the PCR positive in the roach from the Nara and the roach and silver bream from the Volga. Thus, the central part of Russia currently has pestholes of opisthorchosis O. felineus in the small rivers (the Desna, the Nara) and in the Volga in and around the Tver Region. The infection intensity in the roach in the small rivers decreases with age and proceeds as a mono infection, whereas the roach and the silver beam in the Volga were infected with metacercarias of several types of trematodes, and metacercarias O. felineus in such types can be confirmed by the PCR as a bioassay at low concentrations of metacercarias of opisthorchid flukes provides little information. The roach and the tench in Lake Beloye on the east of Moscow were free from all metacercarias of trematodes, whereas some few metacercarias of trematodes that are nonpathogenic for a human being and carnivore were detected in the roach and the silver beam in the Istra Reservoir of the Moscow Region. Very few metacercarias of nonpathogenic trematodes were found in Lake Nero of the Yaroslavl Region.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.