Одоевская Ирина Михайловна, кандидат биологических наук, зав. лабораторией иммунологии и молекулярных исследований
Researcher ID: В-1947-2017
Scopus ID: 24470255200
Москва
Odoevskaya Irina M., candidate of biological sciences, head of laboratory of immunology and molecular research
Researcher ID: B-1947-2017
Scopus ID: 24470255200
Moscow
Пименов Илья Александрович, младший научный сотрудник лаборатории иммунологии и молекулярных исследований
Москва
Pimenov Ilya A., junior researcher at the laboratory of immunology and molecular research
Moscow
Ромашов Борис Витальевич, доктор биологических наук, главный научный сотрудник
Scopus ID: 56633864100
Воронеж
Romashov Boris V., doctor of biological sciences, chief researcher
Scopus ID: 56633864100
Voronezh
Успенский Александр Витальевич, доктор ветеринарных наук, профессор, член-корреспондент РАН, зав. лабораторией паразитарных зоонозов
Researcher ID: Q-2754-2019
Scopus ID: 57195472164
Москва
Uspensky Alexander V., doctor of veterinary sciences, professor, corresponding member of the Russian Academy of Sciences, head of the laboratory of parasitic zoonoses
Researcher ID: Q-2754-201
Scopus ID: 57195472164
Moscow
Цель исследований – изучение таксономической принадлежности и гаплотипического разнообразия изолятов трихинелл, циркулирующих в Воронежском заповеднике и прилегающих территориях Центрального Черноземья, с использованием современных молекулярно-генетических методов и данных международной информационной базы данных (NCBI).
Материалы и методы. В качестве исследуемого материала использовали личинки Trichinella nativa, выделенные из замороженной мышечной ткани диких и домашних животных. Материал собран от погибших в Воронежском заповеднике и на сопредельных территориях при проведении регуляционных мероприятий и регламентированной охоты животных, в результате браконьерской охоты и погибших на автодорогах. Также использовали пробы мышечной ткани от диких и домашних хищных млекопитающих с диагностированной инвазией трихинеллами, зафиксированные в 70%-ном этаноле и 10%-ном формалине. Из полученных личинок была выделена нативная ДНК с после дующим проведением мультиплексной ПЦР (МТ ПЦР) для первичной видовой идентификации. Образцы нативной ДНК, которые удалось идентифицировать с помощью МТ ПЦР, амлифицировали с праймерами 37F_Tri и 42R_Tri для изучения фрагмента мт-ДНК цитохром-С-оксидазы субъединицы 1 (cox1). Полученные ампликоны были секвенированы по Сэнгеру и депонированы в международной базе данных GenBank NCBI.
Результаты и обсуждение. Представленные результаты молекулярно-генетических исследований подтверждают полученные ранее данные о таксономической принадлежности трихинелл – T. nativa (Ромашов и др., 2006). Биоин формационный анализ четырех депонированных нуклеотидных последовательностей показал наличие трех одно нуклеотидных замен в участке гена cox1 T. nativa. Две замены являются синонимичными и не влияют на процесс транскрипции и последующей трансляции, поскольку в обоих случаях кодируется одна и та же аминокислота – валин. Однако, однонуклеотидная замена в позиции 67 у T. nativa (проба от рыси обыкновенной, GenBank №PX624076) приводит к кодированию иной аминокислоты – метионина, что может существенно влиять на биосинтез белков, и, как следствие, изменять физиологические свойства паразита.
The purpose of the research is to study the taxonomic affiliation and haplotypic diversity of trichinella isolates circulating in the Voronezh Nature Reserve and adjacent territories of the Central Chernozem region using modern molecular genetic methods and data from the International Information Database (NCBI).
Materials and methods. The larvae of Trichinella nativa isolated from frozen muscle tissue of wild and domestic animals were used as the studied material. The material was collected from those who died in the Voronezh Nature Reserve and in adjacent territories during regulatory measures and regulated hunting, as a result of poaching and those who died on highways. Muscle tissue samples from wild and domestic predatory mammals with diagnosed trichinella infestation were also used, recorded in 70% ethanol and 10% formalin. Native DNA was isolated from the obtained larvae, followed by Multiplex PCR (MT PCR) for primary species identification. The native DNA samples identified by MT PCR were amplified with primers 37F_Tri and 42R_Tri to study the mt DNA fragment of cytochrome C oxidase subunit 1 (cox1). The obtained amplicons were sequenced by Sanger and deposited in the GenBank NCBI international database.
Results and discussion. The presented results of molecular genetic studies confirm the previously presented data on the taxonomic affiliation of Trichinella – T. nativa (Romashov et al., 2006). Bioinformatics analysis of four deposited nucleotide sequences showed the presence of three single-nucleotide substitutions in the cox1 gene region of T. nativa. The two substitutions are synonymous and do not affect the process of transcription and subsequent translation, since in both cases the same amino acid, valine, is encoded. However, there is a single nucleotide substitution at position 67 in T. nativa (a sample from a common lynx, GenBank №PX624076) leads to the encoding of another amino acid, methionine, which can significantly affect protein biosynthesis and, as a result, alter the physiological properties of the parasite.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.